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中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 　                              硅酸鹽細(xì)菌肥料
Silicate bacteria fertilizer 　　
2000-12-22發(fā)布 2001-04-01實施
中華人民共和國農(nóng)業(yè)部發(fā) 布

前言
　本標(biāo)準(zhǔn)在原有標(biāo)準(zhǔn)NY227-1994《微生物肥料》的基礎(chǔ)上，對其中的硅酸鹽細(xì)菌肥料部分進(jìn)行修改。
主要修改內(nèi)容如下：
—增加術(shù)語、抽樣和判定規(guī)則部分；在檢驗方法中增加允許差；
—在技術(shù)要求中刪除成品無害化指標(biāo)。
本標(biāo)準(zhǔn)自實施之日起，同時代替NY227-1994中的硅酸鹽細(xì)菌肥料部分。
本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A、附錄B、附錄C都是標(biāo)準(zhǔn)的附錄。
本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出。
本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：農(nóng)業(yè)部微生物肥料質(zhì)量監(jiān)督檢驗測試中心、中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院土壤肥料研究所。
本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：李慧荃、吳觀以、李元芳、葛誠、沈德龍。

硅酸鹽細(xì)菌肥料
Silicate bacteria fertilizer
1 范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了硅酸鹽細(xì)菌肥料的分類、技術(shù)要求、檢驗方法、檢驗規(guī)則、包裝、標(biāo)識、運輸與貯存。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于能釋放鉀、磷與灰分元素，改善作物營養(yǎng)條件的有益微生物發(fā)酵制成的活體微生物肥料制品。

2 引用標(biāo)準(zhǔn)

下列標(biāo)準(zhǔn)所包含的條文，通過在本標(biāo)準(zhǔn)中引用而構(gòu)成為本標(biāo)準(zhǔn)的條文。本標(biāo)準(zhǔn)出版時，所示版本均有效。所有標(biāo)準(zhǔn)都會被修訂，使用本標(biāo)準(zhǔn)的各方應(yīng)探討使用下列標(biāo)準(zhǔn)最新版本的可能性。

GB/T 1250一1989 極限數(shù)值的表示方法和判定方法

GB/T 6543一1986 瓦愣紙箱

NY 411一2000 固氮菌肥料

NY 227一1994 微生物肥料

3 定義
本標(biāo)準(zhǔn)采用下列定義：

3.1 硅酸鹽細(xì)菌肥料在土壤中通過其生命活動，增加植物營養(yǎng)元素的供應(yīng)量，刺激作物生長，抑制有害微生物活動，有一定的增產(chǎn)效果。

4 產(chǎn)品分類按劑型不同分為：液體菌劑、固體菌劑和顆粒菌劑。

5 技術(shù)要求
     5.1 菌種非致病菌，能在含鉀的長石粉、云母及其他礦石的無氮培養(yǎng)基上生長，菌體內(nèi)和發(fā)酵液中存在鉀及刺激植物生長的激素物質(zhì)。
     5.1.1 菌種用膠凍樣芽孢桿菌（Bacillus mucilaginosus）的一個變種菌株或環(huán)狀芽孢桿菌（B. circulans）及其他經(jīng)過鑒定用于硅酸鹽細(xì)菌肥料生產(chǎn)的菌種，嚴(yán)格控制各種遺傳工程微生物菌種（GEM）的使用。凡用本標(biāo)準(zhǔn)以外的菌種必須經(jīng)過鑒定。
     5.1.2 菌體大小為4~7μm×1~1.2μm，長桿狀，兩端鈍圓，胞內(nèi)常有1~2個大脂肪顆粒，革蘭氏染色呈陰性，有莢膜，有橢圓形芽孢。
     5.1.3 在無氮培養(yǎng)基上生長的菌落粘稠，富有彈性，呈圓形，邊緣整齊、光滑、有光澤，隆起度大，無色透明。
     5.1.4 在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上基本不生長。

5.2 成品技術(shù)指標(biāo)(見表1)
表1 成品技術(shù)指標(biāo)            項目液體固體顆粒
外觀無異臭味黑褐色或褐色粉狀，濕潤、松散，無異臭味黑色或褐色顆粒
水分，% - 25.0~50.0 ≤10.0
pH值 6.5~8.5 6.5~8.5 6.5~8.5
細(xì)度, % - 過孔徑0.18mm標(biāo)準(zhǔn)篩的篩余物≤20 孔徑5.0mm~2.5mm ≤10
有效活菌數(shù)，個/ml (個/g、個/瓶 )  ≥ 5.0×108 1.2×108 1.0×108
雜菌率1），%     ≤ 5.0 15.0 15.0
有效期2），月    ≥ 3 6 6

1）其中包括10-6馬丁培養(yǎng)基平板上無霉菌。 2）此項僅在監(jiān)督部門或仲裁檢驗雙方認(rèn)為有必要時才檢測。

6 抽樣
   按每一發(fā)酵罐菌液制成的產(chǎn)品為一批，逐批抽樣檢驗。抽樣過程要嚴(yán)格避免雜菌污染。
    6.1 抽樣工具及用品抽樣前預(yù)先準(zhǔn)備好無菌塑料袋(或塑料瓶)、金屬勺、剪刀、封口機(jī)(或封口膠帶)、牛皮紙封樣袋、標(biāo)簽、抽樣封條和膠水。
     6.2 抽樣數(shù)量及抽樣方法在成品庫抽樣，按“ ”形分層設(shè)點抽樣，抽樣以件為單位，小包裝產(chǎn)品以一包裝箱為一件。大包裝（30-50kg）產(chǎn)品以一袋（或一桶）為一件。抽樣基數(shù)由樣品基數(shù)的大小確定。1-10件，全部抽樣。11-200件，抽樣10件；201-400件，抽取20件。樣品基數(shù)大于400件，按照超過部分的2%增加抽樣件數(shù)。總件數(shù)不超過40件。
    每件小包裝產(chǎn)品抽取一小袋，在無菌條件下每袋取樣200g。將所有樣品混勻，按四分法縮到2000g，分裝4袋，然后封口。每2袋為一份裝入牛皮紙封樣袋。
    液體產(chǎn)品每件吸取10mL，一同防入無菌的三角瓶中，混勻后分成兩份，每份250mL。凍干產(chǎn)品，每件取一支防入無菌的三角瓶中，加無菌液體培養(yǎng)液，溶解混勻后分成兩份，每份50mL。貼上抽樣標(biāo)簽和封條（一份被抽樣單位留存，一份交檢測中心檢測）。

  7 檢驗方法
    7.1 儀器設(shè)備及試劑
7.1.1 儀器設(shè)備生物顯微鏡（10×100）；
菌落計數(shù)器；
恒溫培養(yǎng)箱；
恒溫干燥箱；
恒溫?fù)u床；
滅菌鍋；
無菌室或超凈工作臺；
酸度計；
試管：ф15mm×150mm，ф18mm×180mm；
培養(yǎng)皿：直徑9cm；
三角瓶：500mL；
無菌吸管：1、2、5、10mL；
玻璃刮刀；
濾紙；
酒精燈；
標(biāo)準(zhǔn)篩：孔徑0.18mm和0.15mm；
1號羊毛畫筆；
無菌水；
無離子水。

7.1.2 試劑(見附錄A)

7.2 成品檢驗

    7.2.1 氣味檢驗
    取硅酸鹽細(xì)菌肥料樣品打開包裝，進(jìn)行感官檢驗。
     7.2.2 外觀檢驗
    將固體硅酸鹽細(xì)菌肥料包裝打開，裝在白色搪瓷盤中，將液體硅酸鹽細(xì)菌肥料搖勻，在明亮光線下進(jìn)行感官檢驗。
      7.2.3 pH值測定
     液體型樣品：用50mL量筒取40mL樣品放入50mL燒杯中，直接在酸度計上測定，取三次測定結(jié)果的平均數(shù)。
     粉末型、顆粒型樣品：稱取樣品15.0g，放入50mL燒杯中，加入無離子水30mL。通過磁力攪拌使溶液均勻后用酸度計測定pH值。取三次測定結(jié)果的平均數(shù)。
     7.2.4 含水量測定
    稱取固體硅酸鹽細(xì)菌肥料三份，每份20.00g，精確到0.01g，放入已稱恒重的鋁盒中。置105℃干燥箱內(nèi)烘烤4h，移至干燥器內(nèi)，冷卻后稱重。
    根據(jù)烘干前后質(zhì)量差按式(l)計算含水量。取三個樣品測定數(shù)的平均值。平行樣品絕對偏差應(yīng)低于1%。
     含水量(%)=（m0-m1）/m0×100 ………………(1)
式中：m0一烘干前樣品質(zhì)量，g
       m1一烘干后樣品質(zhì)量，g。

    7.2.5 細(xì)度測定
    準(zhǔn)確稱取粉末型樣品50.0g，放入300mL燒杯中，加250mL的自來水浸泡5min，將浸泡好的樣品倒入0.18mm的篩上，用自來水沖洗（沖洗時嚴(yán)防樣品濺出），在沖洗過程中，用刷子輕輕地刷，直至流下清水為止。將篩子連同篩上樣品放到烘箱中，在105℃下烘4h，冷卻后稱篩上樣品。
    篩上樣品百分?jǐn)?shù)含量按式（2）計算，樣品通過0.18mm孔徑篩子的百分?jǐn)?shù)按式（3）計算：
    篩上樣品（%）=篩余物干重/（1-樣品含水百分?jǐn)?shù)）/樣品質(zhì)量×100 ………………(2)
    注：篩上樣品的百分?jǐn)?shù)不得大于20%。

  樣品通過0.18mm孔徑篩子的百分?jǐn)?shù)=1-篩上樣品百分?jǐn)?shù)…………(3)

    顆粒樣品通過篩子測量時，不須水浸泡，將孔徑5.0mm和2.5mm兩篩摞在一起，大孔徑在上，一次通過。篩上物須小于10%。

     7.2.6 有效活菌數(shù)及雜菌率的測定
    平板計數(shù)法，采用選擇培養(yǎng)基（見附錄B），按NY 227-1994中5.2執(zhí)行。

      7.2.6.1 測定步驟準(zhǔn)確稱取樣品10.0g，加入帶玻璃珠的100mL的無菌水中(液體菌劑取l0mL加入90mL的無菌水中)，靜置20min后在旋轉(zhuǎn)式搖床上200r/min充分振蕩30min，即成母液的菌懸液。
     系列稀釋：用無菌吸管分別吸取5mL上述母液的菌懸液加入45mL無菌水中，混勻成1：10稀釋的菌懸液，這樣依次稀釋，分別得到1：1×102，1：1×103，1：1×104，1：1×105等濃度（每個稀釋度必須更換無菌吸管）。
      加樣：用0.5mL無菌吸管分別吸取不同稀釋度菌懸液0.1mL，加至直徑為9cm的選擇培養(yǎng)基表面，用無菌玻璃刮刀將菌懸液均勻地涂于瓊脂表面，或取1mL不同稀釋度菌懸液加入培養(yǎng)皿內(nèi)，與瓊脂培養(yǎng)基混勻，每個樣品取3個連續(xù)適宜稀釋度，每一稀釋度重復(fù)3次，同時加無菌水的空白對照。
       培養(yǎng)：加樣后將平板用無菌紙包好，放入28℃培養(yǎng)38h。
      菌落計數(shù)：根據(jù)所檢測樣品的有關(guān)技術(shù)資料，通過染色、鏡檢等技術(shù)確認(rèn)有效菌的菌落形態(tài)、染色反應(yīng)和個體形態(tài)后，分別統(tǒng)計有效菌數(shù)目和雜菌數(shù)目。當(dāng)空白對照平皿出現(xiàn)菌落數(shù)大于4時，檢測結(jié)果無效，須重做。每個稀釋度取5~10個菌落的菌體，涂片染色（見附錄A、附錄B），顯微鏡觀察識別后，選一個適宜稀釋度（菌落在30~300個之間的平板），計算出同一稀釋度三個平皿上菌落平均數(shù)。
     有效活菌數(shù)按式（4）計算：
    有效活菌數(shù)（個/g）=菌落平均數(shù)×稀釋倍數(shù)×母液菌懸液的體積/菌劑克數(shù)或毫升數(shù)/加樣量 …………………(4)
     雜菌數(shù)是指在選擇培養(yǎng)基上，除有效活菌外的其他種菌的菌落數(shù)與馬丁培養(yǎng)基上霉菌數(shù)之和。

      7.2.6.2 霉菌數(shù)測定

     將10-2或10-3稀釋度菌液0.1mL加到馬丁培養(yǎng)基，操作步驟同樣品有效活菌數(shù)檢測操作。
     雜菌率(%)=雜菌數(shù)/（有效菌數(shù)+雜菌數(shù)）×100 …………………(5)

     7.2.7有效期檢驗
      在產(chǎn)品說明書標(biāo)明的有效期到達(dá)前10d測定成品各項指標(biāo)，方法同7.2.1~7.2.6。

  8 檢驗規(guī)則
     8.1 檢驗分類
        8.1.1 產(chǎn)品出廠檢驗產(chǎn)品交貨時進(jìn)行的檢驗。
        8.1.2 產(chǎn)品型式檢驗新產(chǎn)品鑒定或國家質(zhì)檢機(jī)構(gòu)質(zhì)量監(jiān)督檢驗。
     8.2 檢驗項目型式檢驗的檢驗項目按5.2要求進(jìn)行。出廠檢驗不檢有效期。
     8.3 判定規(guī)則

        8.3.1 合格產(chǎn)品: a) 檢驗結(jié)果符合5.2所規(guī)定的技術(shù)指標(biāo)的產(chǎn)品為合格產(chǎn)品； b) 產(chǎn)品有效活菌數(shù)符合指標(biāo)，雜菌率不符合指標(biāo)，但小于本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的兩倍時，而且在馬丁培養(yǎng)基平板上霉菌數(shù)小于30×10-5，其他指標(biāo)有一項不符合，也可判為合格產(chǎn)品； c) 產(chǎn)品有效活菌數(shù)及雜菌率符合指標(biāo)，在水分、外觀、pH值、細(xì)度等次要檢測項目中，有兩項不符合技術(shù)指標(biāo)，也判為合格產(chǎn)品。

          8.3.2 不合格產(chǎn)品: a)  產(chǎn)品有效活菌數(shù)不符合技術(shù)指標(biāo)或投入菌種沒有完全相應(yīng)的檢驗出，判為不合格產(chǎn)品； b)   產(chǎn)品雜菌率超過本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的兩倍，判為不合格品； c)   在10-6馬丁培養(yǎng)基平板上霉菌數(shù)，判為不合格產(chǎn)品； d)   產(chǎn)品水分、pH值、細(xì)度、外觀等次要檢測項目中，有3項不符合技術(shù)指標(biāo)，判為不合格產(chǎn)品。

        8.3.4 本標(biāo)準(zhǔn)中質(zhì)量指標(biāo)合格判斷，采用GB/T 1250中修約值比較。

9 包裝、標(biāo)識、運輸和貯存

    9.1 包裝
      9.1.1 內(nèi)包裝液體肥料小包裝用塑料瓶或玻璃瓶，大包裝用塑料桶。固體肥料用不透明聚乙烯塑料袋包裝。凍干菌劑用玻璃指形管真空干燥。
       9.1.2 外包裝
     外包裝采用紙箱，紙箱質(zhì)量應(yīng)符合GB/T 6543要求。箱外用尼龍打包帶加固。
        9.1.3 每箱(袋)產(chǎn)品中附有產(chǎn)品合格證和使用說明書，在使用說明中標(biāo)明使用方法、用量及注意事項。

     9.2 標(biāo)識、運輸和貯存
  硅酸鹽細(xì)菌肥料的標(biāo)識、運輸和貯存按NY 411-2000中的9.2、9.3和9.4執(zhí)行。

　  附錄（略）

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