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標準類別：NY-行業標準（農業）

　　關鍵詞：微生物肥料

　　標準號：NY227—94

　　標準名稱：微生物肥料*

　　標準分類：農業土壤化肥標準

　　頒布部門：

　　頒布日期：

　　實施日期：

　　========================================================

　　1主題內容與適用范圍

　　本標準規定了微生物肥料產品的分類、技術要求、試驗方法、檢驗規則、包裝、標志、運

　　輸與貯存。

　　本標準適用于有益微生物制成的，能改善作物營養條件（又有刺激作用）的活體微生物肥料制品。

　　2引用標準

　　GB8172蛔蟲卵測定方法

　　GB4789大腸菌值測定方法

　　GB7468總汞測定方法

　　GB7471總鎘測定方法

　　GB7466總鉻測定方法

　　GB7485總砷測定方法

　　GB7470總鉛測定方法

　　3產品分類

　　31根瘤菌肥料：能在豆科植物上形成根瘤（或莖瘤），同化空氣中的氮氣，供應豆科植物

　　的氮素營養。用根瘤菌屬（Rhizobium）或慢生根瘤菌屬（Bradyrhizobium）的菌株制造。

　　32固氮菌肥料：在土壤和很多作物根際中同化空氣中的氮氣，供應作物氮素營養；又能

　　分泌激素刺激作物生長。用下列菌種之一制造。

　　固氮菌屬（Azotobacter）

　　氮單胞菌屬（Azomonas）

　　固氮根瘤菌屬（Azorhizobium）

　　根際聯合固氮菌：固氮螺菌屬（Azospirillum）

　　陰溝腸桿菌（Enterobactercloacea）經鑒定為非致病菌

　　糞產堿菌（Alcaligenesfaecalis）經鑒定為非致病菌

　　肺炎克氏桿菌（Klebsiellapneumoniae）經鑒定為非致病菌

　　其他經過鑒定的用于固氮菌肥料生產的菌種。

　　這些菌主要特征是在含一種有機碳源的無氮培養基中能固定分子態氮。

　　33磷細菌肥料：能把土壤中難溶性磷，轉化為作物可以利用的有效磷，改善作物磷素營

　　養。用下列菌種之一制造。

　　分解有機磷化合物的細菌：

　　解磷巨大芽胞桿菌（Bacillusmegatheriumphosphaticum）

　　解磷珊瑚紅賽氏桿菌（Serratiacarolleraphosphaticum）

　　節桿菌屬中的一些種（Arthrobactersp.）

　　轉化無機磷化合物的細菌：

　　假單胞菌屬中的一些種（Pseudomonassp.）

　　其他經過鑒定的用于磷細菌肥料生產的菌種。

　　有機磷細菌在含磷礦粉或卵磷脂的合成培養基上有一定解磷作用，在麥麩發酵液中都含刺激植物生長的生長素物質。

　　無機磷細菌具有溶解難溶性磷酸鹽的作用。

　　34硅酸鹽細菌肥料：能對土壤中云母，長石等含鉀的鋁硅酸鹽及磷灰石進行分解，釋放

　　出鉀、磷與其他灰分元素，改善作物的營養條件。本品的生產菌種為膠質芽胞桿菌（Bacil

　　lusmucilginosus）的菌株及其他經過鑒定的用于硅酸鹽細菌肥料生產的菌種。

　　該菌在含鉀長石粉的無氮培養基上有一定解鉀作用，菌體內和發酵液中存在刺激植物生長的生長素物質。

　　35復合微生物肥料：含有上述（解磷、解鉀、固氮微生物）或其他經過鑒定的兩種以

　　上互不拮抗微生物，通過其生命活動，能增加作物營養供應量。

　　4技術要求

　　41成品技術指標1）

　　表1成品技術指標1）

　　劑型液體固體顆粒

　　項目

　　黑褐色或褐色粉

　　1.外觀無異臭味液體褐色顆粒

　　狀、濕潤、松散

　　2有效活菌數

　　根瘤菌肥料

　　慢生根瘤菌，億/mL#511

　　快生根瘤菌，億/mL#1021

　　固氮菌肥料，億/mL#511

　　硅酸鹽細菌肥料，億/mL#1021

　　磷細菌肥料

　　有機磷細菌，億/mL#511

　　無機磷細菌，億/mL#1532

　　復合微生物肥料，億/mL#1021

　　3水分，%-20!35<10

　　4細度，mm-粒徑0.18粒徑2.5!4.5

　　5有機質（以C計），%#2025

　　（以蛭石等作為吸附劑不在此列）

　　6pH5.5!76.0!7.56.0!7.5

　　7雜菌數，%$51520

　　8有效期不得低于六個月

　　注：1）在產品標明的失效期前有效活菌數應符合指標要求，出廠時產品有效活菌數必須高出本指檔30%以上。

　　42成品無害化指標

　　表2成品無害化指標

　　編號參數單位標準限值

　　1.蛔蟲卵死亡率%95!100

　　2大腸桿菌值101

　　3汞及化合物（以Hg計）mg/kg$5

　　4鎘及化合物（以Cd計）mg/kg$3

　　5鉻及化合物（以Cr計）mg/kg$70

　　6砷及化合物（以As計）mg/kg$30

　　7鉛及化合物（以Pb計）mg/kg$60

　　5檢測方法

　　51外觀

　　感觀檢驗符合41成品技術指標。

　　52有效活菌數和雜菌含量測定

　　521試劑和溶液

　　a.無菌水、蒸餾水；

　　b.選擇培養基（附錄A）；

　　c.剛果紅染液（0.5%）。

　　522儀器

　　a.顯微鏡1000；

　　b.搖床旋轉式200r/min；

　　c.恒溫培養箱；

　　d.恒溫烘干箱；

　　e.滅菌鍋；

　　f.扭力天平（分度值0.01g）；

　　g.玻璃儀器（滅菌的9cm平皿、10mL、5mL、1mL吸管、三角瓶、玻璃刮刀）。

　　523測定步驟

　　5231采樣應不少于500g，從中稱取10!20g

　　（精確0.01g），加入帶玻璃珠的100!

　　200mL的無菌水中（液體菌劑取10!20mL，加入90!180mL的無菌水中），靜置20min后在

　　旋轉式搖床上200r/min充分振蕩30min，即成母液的菌懸液。

　　5232用無菌吸管吸取5mL上述母液的菌懸液加入45mL無菌水中，混勻成110稀釋的菌懸液，這樣依次稀釋，分別得到11l02，11103和11104，11105等濃度（每個稀釋度必須更換無菌吸管）。

　　5233用1mL無菌吸管分別吸取不同稀釋度菌懸液0.1mL，加至直徑為9cm平皿的瓊脂培養基表面，用無菌玻璃刮刀將菌懸液均勻地涂于瓊脂表面。或取1mL不同稀釋度菌懸液加入培養皿內，與瓊脂培養基混勻。每個樣品取3個連續適宜稀釋度，每一稀釋度重復3次，同時加無菌水的空白對照，培養2!5d，每個稀釋度取5!10個菌落的菌體，涂片染色，顯微鏡觀察識別后計數菌落。

　　524計算公式：

　　統計算出同一稀釋度三個平皿上菌落平均數。

　　根據式（1）和式（2）計算：

　　菌劑含菌數=菌落平均數稀釋倍數母液菌懸液的體積

　　菌劑數…………（1）

　　雜菌率（%）=雜菌數

　　有效菌數+雜菌數100……………………（2）

　　根據菌落特征判定，分別計算出制品中的特定微生物及雜菌數率。固體（包括顆粒）菌劑含菌數以億/g表示，液體菌劑含菌數以億/mL表示。

　　525菌落計數

　　5251以平板上出現30!300個菌落數的稀釋度平板為計數標準。

　　5252當只有一個稀釋度，其平均菌落數在30!300之間時，則以該平均菌落數乘以其稀釋倍數（見表3例1）。

　　5253若有兩個稀釋度，其平均菌落數均在30!300之間，應按兩者菌落總數之比值來決定。若其比例小于2應計數兩者的平均數，若大于2則計數其中稀釋較小的菌落總數（見表3例2及例3）。

　　5254若三個稀釋度的平均菌落數均大于300，則應按稀釋度最高的平均菌落數乘以稀釋倍數（見表3例4）。

　　5255若三個稀釋度的平均菌落數均小于30，則應按稀釋度最低的平均菌落數乘以稀釋倍數（見表3例5）。

　　5256若三個稀釋度的平均菌落數均不在30!300之間，則以最接近300或30的平均菌落數乘以稀釋倍數（見表3例6）。

　　表3計算菌落總數方法的示例

　　不同稀釋度的平均菌落數兩個稀釋度菌落總數

　　例次10-510-610-7菌落數之比個/mL或個/g

　　1143115922-1.6108

　　22760235311.32.7108

　　32676136342.51.4108

　　4無法計數1142312-3.1109

　　528125-2.8106

　　6無法計數30318-3.0108

　　53含水量測定

　　531儀器

　　a.土壤鋁盒；

　　b.扭力天平（分度值0.01g）；

　　c.恒溫烘干箱；

　　d.干燥器。

　　532測定步驟

　　稱取樣品30!40g

　　（精確到0.01g）二份放入鋁盒中，于105條件下烘烤4h直至恒重，

　　取出后放入干燥器內冷卻，一般冷卻20min，再稱其殘重和鋁盒重，損失量即為水分含量。

　　533計算公式：

　　m

　　H0-m1

　　2O%=m100……………………………………………………………（3）

　　0

　　式中：m0———表示烘干前樣品重，g；

　　m1———表示烘干后樣品重，g。

　　54pH值測定

　　541試劑和溶液

　　無離子水。

　　542儀器

　　a.燒杯；

　　b.酸度計；

　　c.扭力天平（分度值0.01g）。

　　543測定步驟

　　隨機稱取樣品8g，將樣品置于干凈燒杯內，按12加入無離子水，浸泡振蕩均勻。預熱pH計，用標準溶液（pH6.86）校正儀器后，測定樣品懸液pH，邊測邊攪拌，儀器讀數穩定后記錄。每個樣品重復三次。

　　55細度檢驗

　　551儀器

　　a.扭力天平（分度值0.01g）；

　　b.標準篩孔徑0.18mm孔徑0.25mm。

　　552測定步驟

　　供檢樣100g，經過105烘干1h，過孔徑018mm標準篩，篩下部分占檢樣重量#80%，其他部分全部通過孔徑025mm篩，即為合格。

　　56有機質測定

　　561儀器

　　a.瓷坩堝；

　　b.烘箱；

　　c.高溫電爐；

　　d.干燥器；

　　e.扭力天平（分度值0.01g）。

　　562測定步驟

　　采用灼燒減重法測定。稱取樣品10g，置已稱重的瓷坩堝中于60烘箱中烘4!6h，冷卻稱重（m0）。然后在550!600高溫電爐中灼燒2h，用坩堝鉗取至干燥器中，放冷至室溫，稱重（m1）。

　　563計算公式

　　有機質m

　　%=0-m1

　　m100…………………………（4）

　　式中：m0———表示坩堝加烘干樣品重，g；

　　m1———表示坩堝加灼燒后樣品重，g；

　　m———表示風干后樣品重，g。

　　57有毒物質（重金屬）的測定

　　571汞

　　按GB7468操作。

　　572鎘

　　按GB7471操作。

　　573鉻

　　按GB7466操作。

　　574砷

　　按GB7485操作。

　　575鉛

　　按GB7470操作。

　　58蛔蟲卵的測定

　　按GB8172操作。

　　59大腸菌值的測定

　　按GB4789操作。

　　6檢驗規則

　　61生產微生物肥料所使用的菌種，須在本標準菌種規定范圍之內。若使用規定之外的菌種，必須經過國家級科研單位的鑒定，包括菌種屬及種的學名，形態，生理生化特性，效力，安全性等完整資料。以杜絕一切植物檢疫對象，傳染病病源作為菌種生產的產品。

　　62本標準規定中的成品無害化指標和有效活菌數、雜菌數及有效期，是微生物肥料質量安全、有效的重要依據，一切微生物肥料的產品必須達到的指標。成品無害化檢驗可委托省市以上環境監測機構進行，并提供檢驗證明。有效活菌數、雜菌數，由農業部指定檢測機構檢驗。本標準所規定的外觀、水分、細度、有機質和pH值等指標，作為微生物肥料質量檢驗參考指標。

　　63復合微生物肥料，是指兩種以上微生物菌種的復合。不論使用何種微生物菌種、幾種菌種生產，其菌種必須符合本標準（6.1）規定。而且有效活菌數：液體型不得低于10億/mL固體型不得低于2億/g，顆粒型不得低于1億/g。復合微生物肥料的成分中，除主體微生物外，含有其他基質成分的，其基質成分應有利于微生物肥料中的菌體生存，絕不能降低或抑制菌體的存活。因加基質成分過多、不當，微生物肥料有效活菌數過低或有效活菌數測不出來的而不達標者，則該產品不是微生物肥料。

　　64微生物肥料應由生產廠的技術檢驗部門進行檢驗，生產廠應保證所有出廠的微生物肥料都達到本標準要求，每批出廠的微生物肥料都應附有一定格式的質量合格證明。

　　65微生物肥料按批檢驗，以每一發酵罐生產的產品為一批。

　　66取樣方法，隨機抽樣，以箱或袋為抽樣單位。每批固體菌劑抽樣5!10箱。每箱中抽1袋，無菌操作取樣100g，混勻用四分法縮分到500g，供檢驗用。顆粒菌劑每批抽樣5

　　或10袋，無菌操作，每袋取樣05kg，仔細混勻后，用四分法縮分到500g，以供檢驗用。

　　液體菌劑每批抽樣5或10箱，每箱抽1瓶，無菌操作，每瓶吸取5mL一同放入無菌的三角瓶中，搖均勻，瓶上粘貼標簽，標明產品名稱、取樣日期、批號、取樣人，以供檢驗用。

　　67如果檢驗結果不符合標準規定時，應以加倍數量按規定選取試樣進行檢驗，如仍不

　　符合標準規定，該批產品判為不合格。

　　7包裝、標志、運輸與貯存

　　71微生物肥料固體菌劑內包裝材料用聚乙烯薄膜袋，外用紙箱包裝。液體菌劑小包裝用玻璃質疫苗瓶或塑料瓶，外包裝紙箱。顆粒菌劑用編織袋內襯塑料薄膜袋包裝，袋口須密封牢固。

　　72包裝箱（袋）上應印有產品名稱、商標、標準號、生產許可證號、生產廠名、廠址、生產日期、有效期、批號、凈重、防曬、防潮、易碎、防倒置等標記。內包裝袋上應印有產品名稱、商標、標準號、有效細菌含量，研制、生產單位，產品性能及使用說明。

　　73每箱（袋）產品中附有產品合格證和使用說明書。

　　74適用于常用運輸工具，運輸過程中應有遮蓋物，防雨淋、防日曬及35以上高溫。氣溫低于0時需用保溫車（8!10）運輸。輕裝輕卸，避免破損。

　　75微生物肥料應貯存在常溫、陰涼、干燥、通風的庫房內，不得露天堆放，以防雨淋和日曬，防止長時間35以上高溫。碼放高度$130cm。

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